马铃薯病害检测知多少?—Lumex实时荧光微芯片PCR检测法

 

马铃薯在我国广泛种植,已成为仅次于水稻、小麦、玉米的第四大粮食作物。然而在当前的马铃薯生产中,病毒病发生普遍而严重,成为制约马铃薯产业发展的主要障碍,是生产上亟待解决的突出问题。对于马铃薯产业的参与者而言,细菌、真菌及病毒的检测和识别十分重要。本文从病毒种类及相应检测方法进行简要介绍。

1 马铃薯主要病毒种类及致病症状


2 马铃薯病毒主要检测方法

2.1 酶联免疫吸附检测法
    酶联免疫吸附法(Enzyme linked immunosorbentassay, ELISA)是把抗原-抗体的免疫反应与酶的催化反应相互结合而发展起来的一种综合性技术。该技术是在不影响酶活性和免疫球蛋白分子的反应条件下, 使酶分子和免疫球蛋白分子共价结合成酶标记抗体。酶标记抗体可直接或通过免疫桥与包袱在固相支持物上待测定的抗原或抗体特异性结合,来检测病毒的存在。
ELISA具有特异强 、灵敏度高 、操作简便、易于观察等优点, 非常适合于大规模检测, 适于脱毒苗的检测。方法经济简便,快速直观,但其也存在一定的缺点:

 体的制备所需时间长,费时费力;

 一次只能检测一种病毒,检测多种病毒时灵敏度降低;

 对于蚜虫传播的病;有一些在植物上第一年不表现症状,病毒繁殖量少,无法用 ELISA方法检测;

 检测病毒时还经常存在假阳性反应,给脱毒种薯 (苗 )的检测带来困难。

2.2 PCR检测法
    近来,由于PCR检测的特异性和灵敏性,被广泛运用于许多细菌、真菌、病毒和类病毒的检测。但是,运用普通的PCR分析仪检测多种病原菌时,不仅十分耗时,而且对实验室条件要求严格且需要很长的反应设置时间,易造成人为误差。PCR试剂的运输和贮存对温度要求严格,需要低温环境或干冰包装,温度的变化会直接影响到反应的结果。LUMEX公司自主研发生产的实时微芯片PCR及冻干微芯片,完美克服了普通PCR的局限性。
主要有以下特点:
 ♢ 可同时检测8-10种马铃薯病毒
 ♢ 实时定性定量分析:先进实时荧光微芯片PCR技术可实现快速定量定性分析检测;
 ♢ 专利微芯片技术:样品载体以芯片代替传统离心管,试剂耗量小,上样量仅1-2µl;
 ♢ 加热/冷却速度快:最大升温速度12℃/秒;最大降温速度10℃/秒;提高反应特性
 ♢ 分析快速时间短,DNA样本分析30min,RNA样本分析50min完成检测;
 ♢ 开放和冻干体系可选配专用检测方法试剂包和相应冻干微芯片;
 ♢ 运输储存成本低:固定有PCR试剂的芯片,可以在室温下贮存和运输,用户使用更便利;
    目前LUMEX有三种商品化冻干微芯片已运用于马铃薯产业中:植物病原菌RNA、植物病原菌DNA、土壤中线虫的DNA的检测。目前已在俄罗斯,加拿大等国外市场普遍应用。
具体操作步骤:



2.3 其他方法

寄主生物学检测法,抗血清检测法及电镜检测法等检测方法。
3 小结

高效可靠的病毒检测手段是确保马铃薯脱毒种薯(苗)无毒的前提和基础,LUMEX实时微芯片PCR及马铃薯冻干微芯片整体解决方案必是最经济有效的不二选择。

4 参考文献
1. 李入贤,张文龙,施文娟. 马铃薯脱毒种薯(苗)病毒检测技术研究进展[J].种子,2009,28(4):60-62.
2. 罗燕娜,刘江娜,王航. 马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法[J].实验技术,2015,(3):65-67.